بیماری آنفولانزای مرغی

[sara_ranjbar1977]

بیماری آنفولانزای مرغی
(قسمت اول)

[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]

تاریخچه :
این بیماری كه [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] در پرندگان عفونی می شود برای اولین بار در سال 1878، بیش از صد سال پیش در ایتالیا شناخته شد . تا اوائل سال 19[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]از پرندگان با ویروسهای آنفولانزای A پستانداران مشخص نشده بود (برای اولین باردردهه930 ) .
آنفولانزای مرغی در ایالت متحده در سال 25 ـ 1924 شایع شد و در سال 1929 دوباره این شیوع رخ داد در حالی كه هر دوبار ریشه كن شد .
یك پاندمی [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]. بیش از دو سال وقت و70 میلیون دلار هزینه برای ریشه كنی آن صرف گردید و بطور تخمینی 17میلیون پرنده طی برنامه ریشه كنی معدوم شدند .
فقط ویروسهای آنفولانزای تیپ A بعنوان عوامل طبیعی عفونت زائی در پرندگان شناخته شده [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]جدا شده اند .
ایالت متحده هیچ شیوع وسیعی از سال 1986 نداشته است اگر چه سویه های كم پاتوژن در حال حاضر وجود دارند وخسارات قابل توجه ای نیز به بارمی آوردند.
در سال 97 ـ 1996 تعدادی از مزرعه های تخم گذار در مناطق لبانون و لنكستر تیتر PA [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]دارای اثرات وسیع مخرب برروی صنعت طیور بود .
در سال 1994 یك شیوع آنفولانزای مرغی در مكزیك رخ داد كه به صورت ملایم و خفیف شروع شد اما در اثر موتاسیون به یك ویروس[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]
یك سناریوی مشابه در شمال شرقی ایالت متحده در اواسط 1980 رخ داد .

سرو تایپ بسیار پاتوژنی كه سبب شیوع در سالهای 84 ـ 1983 در ایالت متحده و مكزیك گردید H5N2 نام داشت .
از نظر تاریخی ، سروتایپهای H5 و H7 با بیماری های با حدت بالا در طیور همراه هستند .

پرندگان وحشی :

اولین جداسازی ویروس آنفولانزا از پرندگان شكاری درسال1961 از پرستوهای معمولی (stema hirundo) در جنوب آفریقا صورت گرفت ، اما تا اواسط دهه1970 هیچ گونه تحقیق سیستماتیكی[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] باشند و ویروس می تواند در این جمعیت ها پایدار بماند .

پرندگان قفسی :

از سال 1975 [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]جداسازی از پرندگان قفسی به ثبت رسید مشخص شد كه تمامی نمونه های جداشده از پرندگان قفسی بطور عمده از تحت تیپ H3 و H4 می باشند .

ویروسهای آنفولانزای مرغی بطور عمده از گونه های گنجشكیان جدا م[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]از آن منطقه پرندگان را در قرنطینه برای مدت دوره كمون تحت مراقبت نگه می دارند.

مثالهای تأئیدشده ای از عفونت های انسانی با ویروسهای آنفولانزا از سال 1997:

1997 : در هنگ كنگ ، آنفولانزای مرغی تیپ (A H5N1) هم جوجه ها هم انسانها را عفونی ساخت ، این اولین باری بود كه ویرو[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]

كه ویروس ها ابتدا از طریق پرندگان در میان انسانها شایع شدند وانتقال شخص به شخص كمتر مورد توجه می باشد .

احتمال پاندمیك شدن یك آنفولانزای مرغی :

تمامی [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]مرغی تغییر پیدا كند و توانایی آلوده ساختن انسان را پیدا كند و براحتی از شخص به شخص منتقل شود . بدلیل اینكه این ویروسها به طور معمول انسانها را عفونی نمی سازند باعث شده كه در میان جمعیت انسانی هیچ مصونیتی یا به میزان خیلی[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]مرغی قادر باشد انسانها را آلوده سازد و براحتی از شخص به شخص منتقل شود یك پاندمی آنفولانزا می تواند پیش آید . پاندمی های گذشته آنفولانزا سبب مرگ و میر و خسارات اقتصادی بالایی شده اند .

در قرن بیستم 3 پاندمی رخ داده است:

1-1919 ـ 1918 : آنفولانزای اسپانیایی: (A H1N1) ، سبب بالاترین مرگ ومیر شده بیش از 500000 نفر در ایالت متحده و 20 تا 50 میلیون نفر احتمالاُ در تمام دنیا [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]می شدند در گذشتند . تقریباُ نیمی از آنها جوان و بالغین سالم بودند .

2-1958 ـ1957 : آنفولانزای آسیایی: ( A H2N2) سبب حدود 70000 مرگ و میر در ایالت متحده شده است . اولین بار در كشور چین [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]تا ژوئن 1957 در ایالت متحده منتشر شد .
3-1969 ـ 1968 : آنفولانزای هنگ كنگی: (A H3N3) سبب به طور تخمینی 34000 مورد مرگ ومیر در ایالت متحده گردید . این ویروس اولین بار در هنگ كنگ در اوائل 1968 شناسایی شد و تا اواخر سال به ایالت متحده سرایت كرد . تیپ (AH3N3) هنوز تا امروز نیز در چرخش است . وقتی كه یك پاندمی آنفولانزای [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]سازمان بهداشت جهانی دارای برنامه های وسیعی برای نشان دادن میزان فعالیت آنفولانزا در تمام دنیا می باشند كه شامل رسیدگی سریع به سویه های ویروسی كه احتمال پاندمیك شدن آنها وجود دارد می باشد .

دیگر مثالهای تأئید شده از عفونت آنفولانزای مرغی در انسانها :

1999 : در هنگ كنگ ، مواردی از آنفولانزای مرغی A تیپ (H9N2) در دو كودك تأئید شد كه هر دو بیمار بهبود یافتند و موارد دیگری تأئید نشد . شواهد دال بر این است كه طیور منبع عفونت بودند و راه اصلی انتقال از پرنده[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]شد .

2003: آنفولانزای مرغی تیپ (A H7N7) در میان كارگران مرغداری وخانواده هایشان در نیدرلند طی شیوع آنفولانزا در مرغداری ها شایع شده بیش از 80 مورد بیماری گزارش گردید ، (علائم به صورت عفونت چشمی به ه[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]داشت .

2003 : عفونتH9N2 در یك كودك در هنگ كنگ تأئید گردید . كودك بستری شد اما بهبود یافت . همچنین ویروسهای آنفولانزا كه مسئول پاندمیك های 1957 و 1968 بودند بوسیله نوتركیبی ژنتیكی بین انسان و ویروسهای مرغی پدید آمدند .

همزمان با اولین گزارش انتقال داخل گونه ای ویروسهای خوكی به انسان در سال 1974[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]ایالت متحده در سال 1976 گزارش شد .
متعاقباُ ، ویروسهای نوتركیب آنفولانزای خوكی به نام ویروس آنفولانزای مرغی ـ انسانی A H3N2 نشان داده شد كه مسئول دو مورد آنفولانزا در بچه های كم سن و [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]نوتركیب دارای ژنهای شبه مرغی بودند كه پروتئین های داخلی را كد می كردند و ژنهای شبه انسانی HA و NA را داشتند .

ویروسهای تیپ A آنفولانزا می توانند تعدادی از رده های حیوانی را شامل : [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]سازند ویروسهای آنفولانزای مرغی نامیده می شوند.پرندگان بخصوص دارای اهمیت ویژه ای هستند به دلیل اینكه تمامی تحت تیپهای آنفولانزای A در میان پرندگان وحشی كه میزبانهای طبیعی و با [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]

میان انسانها نمی باشند .

آنها را می توان بر اساس قدرت بیماریزائیشان به دو گروه مجزا دسته بندی كرد . ویروسهای بسیار پاتوژن مسبب طاعون پرندگان كه امروزه بخش ویروسهای آنفولانزای بسیار پاتوژن را تشكیل می دهند (HPAT) كه در آن میزان مرگ و میر ممكن است تا 100% برسد . این ویروسها به [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] . تمام ویروسهای باقی مانده باعث بروز بیماری ملایم و ابتدائی تنفسی می شوند كه ممكن است بوسیله دیگر عفونتها یا وضعیت های محیطی تشدید گردد.

ویروسهای آنفولانزا تیپ A بر اساس پروتئین های سطحی شان یعنی هماگلوتینین (HA) و نورآمینیداز (NA) تقسیم بندی می شوند . تعداد 15 تا تحت تیپ HA و 9 تا [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]میان انسانها هستند. آنفولانزای مرغی معمولاُ پرندگان وحشی را بیمار نمی سازد ولی می تواند پرندگان اهلی را شدیداُ بیمار ساخته وآنها را بكشد . بطور معمول انسانها را عفونی نمی سازند لیكن تعدادی از مثالهای عفونتهای انسانی و شیوع در میان آنها از سال 1997 گزارش شده است .

هنگامی كه چنین عفونتهایی رخ می دهد مسئولین بهداشت جهانی نشا[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]
امروزه قوانین وسیع حفظ امنیت زیستی از انتشار ویروس به ایالت متحده و كشورهای همسایه جلوگیری می كند . تلاشهای محققان مستقیماُ برروی اینكه چگونه و چرا ویروسهای پاتوژن تبدیل به ویروسهای بسیار پاتوژن و خطرناك می شوند متمركز می باشد این ویروسها دارای RNA ,envelop تك رشته ای منفی كه به تایپهای A وB وC طبقه بندی می شوند هستند
ژنوم ویروس آنفولانزای [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]
ماهیت سگمنته ژنوم باعث نوتركیبی ژنها هنگامی كه سویه های مختلف یك میزبان راعفونی می [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]به نام H1N1 به همراه داشت و مثالهای دیگر كه در تاریخچه ذكر شده است .

انتقال ویروسهای كاملاُ مرغی بطور مستقیم ، بدون هیچ میزبان واسطی مانند خوك تصور می شود كه بوسیله رسپتورهای اختصاصی سلولهای انسانی تعیین گردد . [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]

جدا شده در سال 1999 نیز مرغی بودند كه 6 قطعه ژنی آن كه تركیبات داخلی را كد می كردند مشابه آنهایی بودند كه در سال 1997 در ویروس H5N1 جدا شده از انسان و مرغ مشاهده شده بودند .

اگر چه این گونه انتقال های بین گونه ای غیر معمول می باشد اما كاملاُ مشخص شده كه برای شناسایی زود بهنگام میكروارگانیسم مسئول بیماری ضروری می باشد . تشخیص سریع و تعیین خصوصیت ویروسهای آنفولانزا برای مقایسه [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]
كه در آزمایشگاههای تشخیصی جدا می شوند بطور روتین برای بررسی ژنتیكی و آنتی ژنیكی به آزمایشگاه رفرنس فرستاده می شوند .
گلیكوپروتئین هماگلوتینین ویروس آنفولانزا بعنوان یك پیش ساز تولید می شود (HAO) كه نیاز به شكستن بعد از ترجمه توسط پروته آزهای میزبان جهت فعال شدنش دارد. پروتئین های HAO پیش ساز دسته كم پاتوژن آنفولانزای مرغی دارای یك اسید آمینه آرژنین در محل برش می باشند و فق[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]بفرد پروته آزی این ویروسها قادر هستند در میان پرندگان همانند سازی كنند به ارگانهای حیاتی و بافتها آسیب برسانند كه منجر به بیماری و مرگ می شوند .

مشخصات آنفولانزای مرغی در پرندگان :

بطور عمده پرندگان آبزی بعنوان میزبانهای اصلی این ویروسها را در روده و ترشحات آ[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]كنند. آنفولانزای مرغی در میان پرندگان مستعد هنگامی كه آنها با ترشحات پرندگان آلوده تماس پیدا می كنند منتشر می شود اما در هر حال انتقال دهانی ـ مدفوعی شایع ترین مدل انتشار می باشد .

بیشتر ویروسهای آنفولانزا باعث بروز علائمی در پرندگان وحشی نمی شود یا اینكه فقط علائم خفیفی ایجاد می كنند . البته میزان بروز علائم درانواع پرندگان بسیار متفاوت می باشد و بستگی به سویه ویروس و نوع پرنده دارد. عفونت با ویروسهای اصلی آنفولانزای A ( برای مثال تعدادی از [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] اهلی مانند جوجه ها و بوقلمون می شود.

علائم آنفولانزای مرغی در انسان :

علائم گزارش شده دارای طیفی از علائم آنفولانزای تیپیك (برای مثال تب ، سرفه ، گلودرد [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]عوارض تهدید كننده سلامت می باشد .

انتقال :

پرنده [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]

های بهبود یافته نیز ویروس را البته به میزان كمتری نسبت به گله های با بیماری حاد دفع كنند.

مرغ های وحشی واهلی جزء اولین مخازن ویروسهای آنفولانزا هستند . مرغابی وحشی معمولاُ علائم كلینیكی را نشان نمی دهد ولی می تواند برای مدت طولانی ویروس را حمل كند. بعلاوه، مرغابی می تواند با بیش ازیك نوع ویروس عفونی گردد. تعیین تایپها با این مشكل همراه است كه آنتی بادی [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]موجود در آب و مواد معدنی,آلی ، دریاچه ها و استخرها توسط مرغابی های عفونی دوباره وارد چرخه می شود . مخلوط شدن این[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]

برای مدت نامحدود زنده باقی می ماند.

بنابراین بیماری می تواند از طریق دفع غلط اجساد وكود و یا دیگر محصولات طیور منتشر گردد.

همچنین این بیماری می تواند براحتی توسط مردم و وسایل آلوده به ویروس آنفولانزا منتشر گردد. [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]انتقال به آنها داده شود لباسهایی كه در مزرعه آلوده پوشیده شده باید حتماُ شسته شوند.

حشرات وجوندگان ممكن است بطور مكانیكی ویروس را از پرندگان آلوده به پرندگان مستعد حمل كنند . ویروس آنفولانزای مرغی از تخم های اردك جدا شده است و این مسئله احتمال انتقال عمودی یا vertical را مطرح می سازد اگرچه بطورتیپیك ویروس جنین تخم مرغ رامی کشد. شواهد كم و ناچیزی ازعفونت جوجه با منشأتخم در دست می باشد. ولی سطح پوسته تخم مرغها می تواند با ویروس آلوده شود در نتیجه یك راه انتقال محسوب می شود .
ویروس آنفولانزای مرغی بكرات از پرندگان وارداتی سالم جدا شده است. این پرندگان آلوده یك خطر بالقوه برای پرندگان قفسی، وحشی و گله های طیور پرورشی محسوب می شوند. مغازه های فروش پرندگان زنده یك مخزن عفونت می [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]تجارت طیور می باشد.

صاحبان مرغداریها خود اولین خط دفاعی برای شناسایی شیوع آنفولانزای مرغی هستند. اگر پرندگان در نشان دادن علائم آنفولانزای مرغی پیشرفت كردند بایستی بلافاصله به سازمانهای مسئول اطلاع دهند .

پیشگیری :

برنامه [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]تر مراقبت سخت در طول دوره و جداسازی جوجه های آلوده تنها روش مؤثر در متوقف كردن آنفولانزای مرغی می باشد. موفقیت در چنین برنامه هایی بستگی به همكاری كامل و حمایت دولت از صنعت طیور دارد .

با شناخت این مسئله كه مخزن آنفولانزای مرغی مرغابی های وحشی می باشند هر كوششی باید بر اساس جلوگیری از تماس مستقیم و غیر مستقیم بین پرندگان خانگی و مرغابی های وحشی طرح ریزی گردد .

WHO ([مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]آمده از شیوع 1997 در هنگ كنگ یك منطقه اختصاصی اداری از چین و از گزارشات اولیه از موارد اخیر در تایلند و ویتنام استخراج شده است . همانطور كه اطلاعات بیشتر بدست می آید این راهنمایی ها نیز بطور مناسب تغییر پیدا می كند.

توجه :مفهوم اولیه كنترل عفونت رعایت احتیاط برای به حداقل رساندن انتشار تنفسی بیماری می باشد[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]افرادی كه در رسیك ابتلاء هستند. به منظور درمان آنها با داروهای ضد ویروسی برای كاهش میزان مرگ ومیرو انتشار بعدی بیماری.

هشدارهای عمومی :

كنترل عفونت موجود شامل به كار بردن احتیاط های استاندارد برای تمام بیمارانی كه به بیمارستان مراجعه می كنند می باشد .

اگر كه تشخیص آنفولانزای (A H5N1) بر اساس علائم بالینی داده شود بایستی [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]هم با طیور بیمار و هم با طیوری كه از بیماری تلف شده اند در تماس هستند در معرض ریسك ابتلای بیشتری هستند.

كشور ها یا سرزمین هایی كه بطور تجربی با شیوع آنفولانزای مرغی با بیماریزایی بالا مواجه هستند بایستی افرادی كه در بخش بهداشت و پزشكی كار [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] آنفولانزای مرغی می شود ولی درعوض، فرصتی را برای بازآرائی و ظهور آنفولانزای جدید با قدرت جهانی شدن پدید می آورد.

كنترل عفونت و پیشگیری از انتشار تنفسی آنفولانزای :A (H5N1)

انتقال آنفولانزای انسانی بوسیله قطرات و ذرات منتشر در هوا صورت می گیرد. انتقال توسط تماس مستقیم و غیر مستقیم نیز شناسایی گردیده است. لیكن در طول سال 1997 آنفولانزای (A H5N1) در انسانها در SAR هنگ [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]

هنگام تماس و برخورد با قطرات معلق توصیه كرد. بعلاوه اگر كه یك اطاق با فشار منفی در دسترس باشد بهتر می باشد .

ایزوله كردن بیمار در یك اتاق، اگر كه یك اتاق جداگانه در دسترس نباشد بیماران بایستی به طور جداگانه در یك بخش یا اتاق مجزا بستری شوند. تختها بایستی یك متر با هم فاصله داشته باشد و بهتر است كه تختها بوسیله یك سد فیزیكی مثل پارتیشن از هم مجزا گردند.

مناسب ترین روش برای محافظت اشخاصی كه وارد اتاق می شوند استفاده از گان، [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]

بیمارستان (مانند نظافت چی ها و پرسنل آزمایشگاه) كه با محیط این بیماران در تماس هستند همچنین بایستی محدود گردند .
بایستی از HCW ها (پرسنل بیمارستان ) كه در تماس با بیماران هستند خواسته شود كه روزانه دوبار دمای بدنشان را چك كنند و هرگونه تبی را به مسئولین [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]معرض قرار گرفتن (برای مثال: داروهای خوراكی oseltamivir به میزان روزانه 7mg برای 7روز) برای پرسنل بیمارستانی كه احتمال تماس با ترشحات افراد بیمار برایشان وجود دارد توصیه می شود HCW هایی كه حال عمومی خوبی ندارند نبایستی با بیماران در تماس [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]

[sara_ranjbar1977]

بیماری آنفولانزای مرغی
(قسمت دوم)

[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]

مدیریت بیماران :
گرفتن نمونه خون و دستگاه تنفس و ارسال به آزمایشگاه برای تست [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] بالینی مشترک دارند.
درمان با این هیبیتور نورآمینیداز ها مانند oseltamivir(بصورت 75mg خوراكی، دوبار در روز) بعنوان اولین مراحل درمان بكار میرود .
اگركه علائم[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] عفونت بستری گردد.
اگر كه تشخیص داده شد بیمار نیاز به بستری شدن ندارد بایستی به بیمار و خانواده اش ضوابط بهداشت فردی و كنترل عفونت (برای مثال: شستن دستها، استفاده از [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]دارو تحت درمان حمایتی قرار گیرد همچنین بیمار با پزشك معالج توسط تلفن و یا ویزیت شدن در تماس باشد[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]ویا high-air-flow در سندرم عفونت حاد تنفسی برای پیشگیری از انتشار تنفسی بكار می رود .
این توصیه ها فقط هنگامی كه بیماری شدید باشد و كنترل آن مشكل می باشد مورد نیاز هستند .
گرفتن نمونه های خون و تنفسی بطور مرتب برای چك كردن عفونتهای باكتریایی احتمالی مورد نیاز می باشد. استفاده از درمان آنتی بیوتیكی به صورت تزریقی را نیز باید در[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] در جهت مقاومت ویروسی با توانایی جهانی شدن. نتایج اولیه كه توسط مراكز مختلف بهداشت جهانی بدست آمده پیشنهاد می كند كه ویروس آنفولانزای A )H5N1) كه اخیراُ از انسانها جدا شده اند نسبت به آمانتیدین و ریمانتیدین مقاوم می باشند .
پرهیز از تجویز سالی سیلاتها (مانند آسپیرین) دربچه های زیر 18سال بدلیل ریسك سندرم reye. استفاده از paracetamol یا ibuprofen با هم بصورت خوراكی یا شیافت برای كنترل تب.
تعدیل كنندهای سیستم ایمنی مانند [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]كلینیكی صورت گیرد. پاسخ ایمنی انسان در مقابل آنفولانزای A (H5N1) هنوز نیاز به مطالعات بیشتری دارد .
از ribavirin استفاده نكنید. هیچگونه شواهدی دال بر مؤثر بودن این دارو برعلیه آنفولانزا وجود ندارد در عوض عوارض ناخواسته مانند آن می شایع می باشد و ممكن است [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]در تایلند و ویتنام نیا زبه مطالعات بیشتری می باشد. تا اینكه شواهد دیگری به دست آید در حال حاضر WHO توصیه كرده است كه ضوابط كنترل عفونت تا 7روز بعد از قطع تب ادامه پیدا كند .
مطالعات قبلی برروی [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]بهتر است كه كودكان برای این دوره در محل مراقبت باقی بمانند. كودكان در این مدت نبایستی به مدرسه بروند .
افرادی كه با این بیماران در تماس مستقیم بوده اند بلیستی برای 7روز تحت نظر قرار گرفته شوند و دمای بدن آنها دو بار در روز چك شود اگر كه فردی تب بالاتر از 38c و سرفه یا تنگی نفس را نشان داد بایستی بلافاصله درمان شود .
آنفولانزای مرغی جدید در دانمارک،10000 اردک را از بین برد .
ویروس A H5N1 در اردكها شناسایی شد .
یك نوع جدید ویروس A آنفولانزا،H5N1 ، برای اولین بار در اردكهای دانماركی شناسایی شد. بدنبال ظهور بیماری بین 12000 اردک. در یک مزرعه اردک نزدیک به [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]A از بافت تعدادی از اردكها جدا شد. انستیوسرم سازی statens از RT – PCR طول كامل هماگلوتینین و نورآمینیداز با تعیین توالی روتین كه ترجیحاُ بطور مستقیم برروی نمونه ها انجام می گیرد تا برروی ویروسهای كشت داده شده استفاده كردند و ژنوتیپ این ویروس را H5N7 نام نهادند .
این تایپ قبلاُ هیچ گاه[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] موارد غیر مرتبط ویروس آنفولانزای H3N2) A ) در دانمارک از 1 سپتامبر 2003 تشخیص داده شد.12 سویه ویروس آنفولانزای مرغی (AIV) A از پرندگان وحشی در دانمارک از 1996 جدا شد كه هیچ كدام از آنها H5 یا H7 نبود .
پرندگان وحشی مخزن طبیعی آنفولانزای مرغی هستند. (AIV) اگر چه ویروسهای كمپاتوژن H5 وH7 وجود دارد ولی تمامی ویروسها با بیماری زایی بالا یا H5 یا H7 هستند. پاتوژنسیته ویروسهای AIV H7 و H5 حداقل تا قسمتی وابسته به توالی آمینو اسیدی درمحل برش در HA1/HA2 دارد. چنین توالی های [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]. توانایی تغییر پاتوژنسیته مثلاُ طی تكثیر در پرندگان یا نوتركیبی در خوكها و یا انسانها شناسایی نشده است. ویروسهای بسیار پاتوژن AIV از تیپ H5 و N7 اغلب انسانها را درگیر می سازند. این مسئله در سال 1997 در هنگ كنگ رخ داد (H5N1) كه 6 نفر از 18 فرد آلوده شده از [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]رفتند. سازمان بهداشت جهانی تصویب كرد تمامی كشورها كمیته های بین المللی در مورد مدیریت اپیدمیهای آنفولانزا تشكیل گردد .
شبكه های آزمایشگاهی نظارتی و روشهای ژنوتایپ كردن بایستی با كارهای این كمیته های بین المللی هماهنگ شود .
ویروسهای آنفولانزای [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]عفونت انسانها با ویروسهای آنفولانزای مرغی از 3 تحت تیپ (H5, H7, H9) بكرات تشخیص داده شده است .
ویروسآنفولانزای مرغی H7N7 كه سبب آنفولانزای شدید در 225 مزرعه طیور در هلند در سال 2003 شد همراه با عفونت ملتحمه چشم (conjunctivitis) در 347 [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]عفونت در خوكها دردست می باشد. این شیوع بوسیله جدا كردن و قرنطینه كردن طیور عفونی كنترل شد. برای جلوگیری از پدید آمدن و انتشار ویروس نوترتیب مرغی ـ انسانی كارگران مرغداریها بوسیله واكسن آنفولانزای انسانی واكسینه شدند و داروی آنتی نورآمینیداز به آنها داده شد .
انتقال آنفولانزای مرغی H5N1 به انسانها در سال 1997 ثابت كرد كه این ویروسعلی [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] اسیدمرغی باند شوند توانایی انتقالبه انسان را دارد (برای مثال آنها با یک gal 3 و2 × انتهایی لینک می شوند).
قبل از 1997، گزارشاتی از عفونتهای انسانی باH7N7 وجود داشت (معمولاُ [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]

ارزیابی تلفیق PCR با MOBILITY هترودوبلكس برای تعیین و تشخیص ویروسهای آنفولانزای A از انواع حیوانات:
انتقال ویروسهای آنفولانزای A از حیوانات میزبان به انسان ممكناست به پدید آمدن گونه های جدید با همه گیری جهانی شود. تشخیص زود بهنگام چنین [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]م RT-PCR و (HMA) heteroduplex mobility طراحی گردید. نشان داده شد كه این تغییرپذیری (m) ژن در RT-PCR می تواند حساس شود و برای تعیین ویروسهای آنفولانزای A انسانی و مرغی وخوكی اختصاصی گردد.
قطعات تكثیر شده توسط PCR از ویروسهای انسان، طیور وخوک از 15 تحت تیپ مختلف، با بین 9/1 و4/21 اختلاف نوكلئوتیدی بوسیله روش HMA تمایز گذاشته شد.
تعیین توالی ampliconها نشان داد كه الگوی تغییر پذیری هترودوبلكس با اختلاف توالی ها بین DNA مورد آزمایش ورفرنس مرتبط می باشد. متدت كثیرRT-PCR [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] / 1073 / 99) H9N2 كه با گونه های انسانی واكنش متقاطع داشتند در مقابل panel رفرنس مورد بررسی قرار گرفتند. مشخص شد كه محصولات PCR این سویه بیشترین شباهت را با سویه (A / Quil /Hongkong / GI / 97 ) H9N2 دارد. بررسی توالی ها نشان داد یك اختلاف 101% نوكلئوتیدیبین قطعات amplicon مربوط به A / Quil /Hongkong / GI / 97 و A / Hongkong / 1073 / 99 وجود دارد. با توجه به نتایج كار، روش RT-PCR HMA یك راه سریع و حساس برای جستجوی [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]ی تایپها یا ساب تایپها بوسیله ممانعت از هماگلوتیناسیون (HI) می باشد. از آنجایی که این كارها وقت میبرد و شناسایی گونه های منشأ ویروس ضروری نمی باشدبه همین دلیل روش (RT) – PCR براساس ژن ماتریكس (M) توأم با روش هترودوبلكس (HMA(mobility برروی محصولات PCR پایه گذاری شد .
پروسه خالص سازی نوكلئیك اسیدهایویروس باشناسایی توسطHMA24 تا 36 ساعت [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]PCR HMA كه در اینجا شرح داده می شود به تشخیص زود به هنگام انتقال داخل گونه ای بین میزبانهای انسانی وحیوانی كمک خواهد كرد .

مواد و روشها :
جداسازی ویروس :
ویروسهای آنفولانزا در حفره های آلانتوئیک جنین[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]نگهداری می شود. ویروسهایی كه در این مطالعه استفاده شده اند.
ویروسهای /Taiwan/7310/10 ، A/SW/oms/2899/82 ، A/SW/oms/3633/84، /SW/Scotland/410440/94 ، A/SW/hongkong/168/93 ،A/HK/1774/99 و A/HK/1073/99 بوسیله yipu lin و alan hay مؤسسه بین المللی تحقیقات پزشكی در mill hill انگلستان فراهم شد .
جدا سازی A/DUCK/singapor q/f 119-3/97 بوسیله آزمایشگاه دامپزشكی منشعب از مركز دامپزشكی سنگاپور انجام گرفت .
ویروس تایپنگ : ویروسهای آنفولا[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]ای HI با استفاده از HAU 8 از ویروسها و 5% سلولهای قرمز (vol/vol) turkey انجام گرفت .

سنتز c DNA وخالص سازی نوكلئیك اسید :
RNA ویروسی ازیک میزان 150mg از نمونه بوسیله روش باند شدن با گوآنیدینوم [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]اضافه كردن 2/22 از RNA به 8/17 مخلوط RT حاوی 20Mm Tris-Hcl (PH=8/4) ، 50 Mm ، KCL و 7/5 Mm ، mgcl2 و 3Mm از هر داكسینوكلئوتید تری فسفات و 25ng از پرایمرهای راندم (pdn6) و 1/6 u از rnasine و2007 از revers transcriptase ویروس لوسمی موشی (moloney) انجام می شود .
این مخلوط در دمای c20برای 10 دقیقه انكوبیت می شود و سپس در c37 برای 45 دقیقه [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] های پرایمر بدنبال بررسی نواحی حفاظت شده از ژن m مربوطبه ویروسهای آنفولانزای A بدست آمدند. خصوصیات پرایمرها بانرم افزار oligo primer [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]برای استفاده در یك مایه pcr برای تعیین ویروسهای آنفولانزای انسانی طراحی شده است. هر جفت پرایمر در مجاورت مقدار مشخصی از mgcl2، نمک و PH انجام می گیرد. برای PCR اولیه، 20 L از cdna به 80 L مخلوط PCR حاوی 8 L از بافر 10XPCR ((PH : 8/[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید], taq پلیمراز استفاده می شود .
دمای اپیتیم برای چسبیدن برای جفت پرایمر و حالت چرخشی با استفاده از یک mastercycler Gradient thermalcyler تعیین می گردد. تكثیر اولیه بوسیله 1 سیكل در دمای c94 برای 2 دقیقه انجام می شود و بعد با 30 سیكل دناتوره كردن در [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]های رشد كرده بر روی تخم مرغ به نسبت 1در 10000 قبل از تكثیر ثانویه رقیق می كردند. یک مقدار از محصول اولیه (2 l) سپس به 48 l از مخلوط ثانویه pcr حاوی 5 l از10 xpcr buffr (ph:8/4)tris-hcl ,200mm) و (kcl 500mm و 1 l از مخلوط داكسی نوكلئوزید تری فسفات و 1/5 l از 3 l , 50mm mgcl2 ازهر پرایمر داخلی در [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]c [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]سیكل در معرض 94cبه مدت 1دقیقه و 60c برای یك دقیقه و 72c برای یك دقیقه قرار می گیرند .
Amplicon های (413bp) بوسیله رنگ آمیزی با اتیدیوم بروماید قابل رؤیت می شود و متعاقبأ برروی ژلآگارز2% الكتروفور می شود.

تعیین حساسیت روش (I RT-PCR) تیتراسیون عفونت زایی ویروس :
روش های عفونت زایی همانطور كه قبلاُ شرح داده شد با تغییرات كوچكی انجام می گیرد. تعداد10رقت (10 -10)از ویروسهای syd/[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]o2 درc 37 تغییر پیدا میكند. سلولهای كلیه سگ madin-darby بوسیله گلوتارآلدئید 5% فیكس گردیدند و پلاكه بوسیله رنگ آمیزی با محلول كربول [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] اسید و RT-PCR همانطور كه قبلاُ شرح داده شد قرار داده می شود .

روش Heterduplex :
متدهای آنالیز hma كه قبلاُ شرح داده شد برای مطالعه گونه های مشابه ویروس نقص ایمنی انسان تیپ[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]مخلوط می گردد.
نمونه ها سپس در دمای c 95 برای 2 دقیقه دناتوره می شوند و سریعاُ تا دمایc 4سرد می شوند. سپس برای 10 دقیقه برروی یخ گذارده می شوند. سپس [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]غیر دناتوره 8% در(nove x TBE ) 1 x TBE برای 50 دقیقه در ولتاژ 200V الكتروفورز می شوند. همودوبلكس ها و هترودوبلكس ها بدنبال رنگ آمیزی ژل با sybr greenII قابل رؤیت می شوند.

تعیین توالی وبررسی فیلوژنیك: تعیین توالینوكلئوتیدی amplicon های pcr m ژن با استفاده از روش dye deoxyterminator انجامگرفت .
محصولات PCR m ژن بااستفاده از جفت پرایمر داخلی PCR amp227f و amp622r در 3/2 pmol/reaction [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]ه magaling 4 انجام گرفت .

نتایج :
تعیین میزان حساسیت و اختصاصی بودن RT-PCRبرای m ژن: حساسیت [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]) انجام گرفت. رقتهای سریال و متوالی از عصاره ویروسی تازه این ویروسها در vtm تهیه گردید.ازهررقتی، نوكلئتیک اسیدها برای سنتز cDNA و PCR جمع آوری شدند. به همین میزان نیزبه ارزیابی عفونت [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]RNA ویروسی بوسیله RT-PCR مقایسه گردد.
M ژن كه برای RT-PCR به كارمی رود 10pfu از ویروسهای آنفولانزایA (H9N2 , H5N3 , H3N2) درمیلی[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]اختصاصی برای ژنهای HAاز ویروسهای آنفولانزایA وB میباشد.RT-PCR برای میزان توانائیش در تشخیص ویروسهای آنفولانزایA از انواع حیوانات ومیزای اختصاصی بودنش برای ویروسهای آنفولانزایA[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] A مرغی ، انسانی یا خوكی آزمایش شدند بدست آمد .
این نتایج نشان می دهد كه توالی های m ژن ویروسهای آنفولانزای A تمام حیوانات آزمایش شده را می توان [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]، كه دلالت بر اختصاصی بودن PCR برای توالی های ویروسهای آنفولانزای A می كند .

تعیین مشخصات آمپلیكونهای Mژن بوسیله HMA وتأئید توالی های آن :
بعد از تكثیر M ژن بوسیله RT-PCR اختصاصی بودن محصول PCR برای هر ویروس با منشأ میزبانی خاص بوسیله HMA مورد تحقیق وتخصص قرار گرفت. اینكار با استفاده از بررسی طریقه فرم گرفتن هترودوبلكس بین [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]و خوكی و مرغی صورت گرفت.
هترودوبلكس هایی كه بین آمپلیكونهای سوی هر فرنس (BAY/95) و محصول PCR هر ویروس مورد آزمایش مشاهده می شوند، منعكس كنند تغییر توالی بین ویروس[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] شود .(lane 1,17) كمترین كاهش در تغییر هترودوبلكس درجایی مشاهده می شود كه محصول ویروس رفرنس (bay/95) با آمپلیكون ویروس wuh/371/95 مخلوط گردیده است. (lane 2) هر دو ویروس bay/7/95 و wuh/371/95 از سویه های ویروس آنفولانزای انسانیA ،H1N1 می باشند .
بررسی توالیها بر این امر دلالت می كند كه آم[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]تا 9/1% اختلاف دارند.
بنابراین آمپلیكونهای با بیشتر از 2% variation در توالینوكلئوتیدی بوسیله این روش HMA می تواند متمایز گردد .
هیچ اصلاحی در [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]مه آمپلیكون رفرنس از bay/95 بامحصولات pcr ویروسهایی كه دارای mژنهای ویروسی خوكی یا مرغی مخلوط شده اند مشاهده می گردد. اختلافات نوكلئوتیدی بین آمپلیكونهای pcr از اینویروسهای مرغی و خوكی و ویروس رفرنس [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]ویروسهای انسانی (bay/95) H1N1 و ویروسهای انسانی H3N2 تست و syd/97 و wuh/359/95 مشاهده شد بررسی توالی ها یک اختلاف نوكلئوتیدی 7/6 تا 9/7درصدی را بین ویروس H1N1 [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]
.
ارزیابی یک الگوی رفرنسHMA برای تعیین انتقال بین گونه ها :
یک پانل از 9 و یروس آنفولانزای A با ژنهاب M كه در دو دمان انسانی، خوكی و طیور وجود دارند [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]گیرد .
آمپلیكونهای با اندازه ای كه اتنظار می رفت (314bp) بوسیله ژل آگاروز الكتروفورز قابل رؤیت می شود. یک قسمتی از هر آمپلیكون رفرنس برای hma با محصول pcr ویروس تست (HK/1073/99) مورد استفاده قرار گرفت. بیشترین كاهش در تغییر پذیری [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]مخلوط كردن محصول PCR ویروس HK/1073/99 با آمپلیكونهای رفرنس مشتق شده از ویروسهای خوكی و انسانی تشكیل شدند الگوهای تغییر پذیری گوناگونی را نشان دادند بیشترین شباهت را با [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]شدند مشاهده نشد كه دلالت بر كم بودن اختلاف این آمپلیكونها از میزان حساسیت تست HMA دارد. نتایجHMA بوسیله تعیین توالی مستقیم آمپلیكونهای PCR ، M ژن از 9ویروس رفرنس و ویروس تست تأئید گردید. بررسی توالی ها نشان داد كه اختلاف نوكلئوتیدی بین آمپلیكونهای[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]/97 , مشاهده شد. هیچگونه هترو دوبلكسی هنگامی كه آمپلیكونهای Qa/HK/GI/97 و HK/1073/99 مخلوط شده اند مشاهد نشد كه دلالت بر كم تر بودن اختلاف این [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] تایید گردید. بررسی توالی ها نشان داد كه اختلاف توكلئوتیدی بین آمپلیكونهای Qa/HK/GI/97 و HK/1073/99 به میزان 1/1% ازخوک یا طیور به انسان [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]تشخیص زود هنگام وتعیین خصوصیت واریانت های جدید آنفولانزا كه پدید آمده اند یكی از اهداف شبكه جهانی حفاظت در مقابل آنفولانزا سازمان بهداشت جهانی می باشد .
از این رو ، دست یابی به [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]سریع، مانند ایمونوفلورسنس و enzyme immunoassay برای تشخیص ویروسهای آنفولانزا در نمونه های كلینیكی به كار رفته اند .
گزارش شده كه روش ها دارای اختصاصیت و حساسیت متغیری هستند و مشخص نیست كه چگونه [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]و محافظت ویروسهای آنفولانزا در مواد كلینیكی بخوبی نشان داده شده است. روشهای تكثیر برای تشخیص و ساب تایپ كردن ویروسهای آنفولانزای A وبرای تفریق ویروسهای آنفولانزای A,B,C شرح داده شده است. لیكن این روشها به طور اختصاصی برای تشخیص، نگهداری ویروسهای آنفولانزای انسانی طراحی شده اند و بیشتر احتیاج است كه [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] ژن برای تشخیص ویروسهای آنفولانزای A مربوط به چند گونه شرح داده شده است .
دراین مطالعه یک متد توأم PCR-HMA را برای شناسایی وتعیین خصوصیت نسبی ویروسهای آنفولانزای A از گونه های مختلف طراحی شده.
ژنm1 بعنوان هدف انتخاب شد چرا كه شواهد چنین پیشنهاد می كنند كه m1 ORF در میان [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]آنفولانزای A ، 15 ساب تایپ مختلف با منشاء انسانی، مرغی و خوكی اخصاصی و حساس می باشد . متدهای بعد از تكثیر برای بررسی تغییر توالی در آمپلیوكن های PCR شامل بررسی RFLP ها و HAM ها می باشد.
ارزیابیRFLP ، محصولات m ژن PCR برای ساب تایپینگ ویروسهای آنفلانزای A انسانی و [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]كه موتاسیون در توالی نوكلئوتیدی آن مورد نظر ممكن است منجر به از دست دادن یا پدید آمدن باند شدن آنزیم محدود كننده شود. میزان بالای موتاسیون پذیری RNA ژنوم ها، مانند ژنهای ویروس آنفولانزا احتمال رخ دادن این موتاسیونها را افزایش می دهد .
از آنجائیكه كه بررسی هترودوبلكس نشان داد كه برای تفریق سریع ویروسهای RNA دار بسیار [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]413 bp ژن m شناسایی شده اند، HMA برای تعیین خصوصیات آمپلیكون m ژن انتخاب شد .
HMA بر مشاهده تغییرات توالی بین آمپلیكون های ویروس تست كه باعث پدید آمدن جفت نشدن درست با سویه رفرنس می شود و در نتیجه هترودبلكس ها متعاقباً دناتوره می شوند و دوباره می چسبند استوار است .
هتروبكلس ها آهسته از [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]نیاز برای تفریق مناسب هترودوبلكس ها نشان داده شده كه بین طیف 25 و 5% می باشد.
درجه اختلاف بین آمپلیكونهای m ژن مرغی، خوكی و انسانی بینابین طیف می باشد و باعث تشكیل [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]
[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]به كمی 9/1 تا 1/1 % اختلاف توكلئوتیدی قابل تشخیص بود .
این موضوع با گزارشات [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]از تكثیر ثانویه رقیق شد .
از این موضوع می توان نتیجه گرفت كه هنگام آزمایش مستقیم نمونه های كلینیكی كه حاوی تیترهای پائین تری از ویروس نسبت به مواد رشد كرده بر روی تخم یا سلول هستند این كار ضروری نخواهد بود .
مناسب بودن[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]یک تست ویروس با یك RAMEL ویروسهای رفرنس ارزیابی می گردد. سویه آنفولانزای مرغی H2N2 ( HK/1073/99 ) بعنوان ویروس تست انتخاب گردید چرا كه این ویروس مرغی از یك بچه 4 ساله درهنگ كنگ جدا شده [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]مستقیم و بررسی پلی ژنتیك آمپلیکونهای ویروس تست و رفرنس .
بوسیله HMA، آمپلیكون PCR رفرنس مربوط به Qa/HK/GI/97 ارتباط دارد. این ارتباط بر اساس گزارشات [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]HK/1073/99 , Qa/HK/GI/97 همراه می باشد. درمجموع، نتایج كار نشان می دهد كه انجام توأم HMA,RT-PCR بر روی m ژن یك ابراز قوی برای تشخیص و شناخت ژنتیک ویروسهای آنفولانزا می باشد .HMA یك راه ساده وحساس برای جستجوی m ژنهای ویروس های آنفولانزای جدا شده می [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]نتیجه گیری می شود كه این متد می تواند بطور مستقیم برای تست ویروسها در نمونه های كلینیكی به كار رود بدون اینكه ضرورتی به رشد ویروس اول بر [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] تعیین ویروسهای آنفولانزای B,A به طور مستقیم در نمونه كلینیكی می شود می باشد. ویروسهای آنفولانزای جدید و غیر معمول را كه بوسیله HMA شناسایی شده اند می توان بسیار و سیعتر بوسیله تعیین توالی مستقیم و HI تایپینگ شناسایی و تعیین خصوصیت كرد. پانل HMA ویروس [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]شود. سرانجام ، تكنیک تركیبی RT-PCR هترودوبلكس می تواند برای شناسایی دیگر ژنهای داخلی ویروس آنفولانزا بكار رود.

[sara_ranjbar1977]

بیماری آنفولانزای مرغی


(قسمت سوم)

[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]

شیوع ویروس [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]شده بودند از بین برد و اولین مورد مستند انتقال مستقیم ویروس آنفولانزای مرغی از طیور به انسان بود .
شیوع منجر به گسترش بیماریهای جدی كشنده شد و بعضی به آن بعنوان نخستین حالت پاندمیک اشاره میكنند .
كشتار تمام [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]از بین رفتن منبع عفونت و جلوگیری از انتقال بیشتر به انسانها شد. ویروسهای H5N1 انسانی جداشده (/97 H5N1 ) تصور می شود كه بطور طبیعی از نوترتیبی [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]همانند ساز آن بمیزان زیادی با كمپلكس مانند ساز یروسهای (H9N2)A/guail/Hongkong/GI/97,(H6N1)Alteal/Hongkong/W312/97 مشابه می باشد.
ژننورآمینید از (NA ) ویروس [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]چین ادامه دادند. این ویروسها با ویروسهای با منشاء مرغان آبی نو تركیبی داشتند و ژنوتیپهای چندتایی ویروسهای H5N1 حاوی ژنهای NA,HA از ویروسهای شبه GO/Gd در فروشگاه های طیور هنگ كنگ بین فوریه وMay 2001 دوباره ظاهر شدند.
این ظهور دوباره ویروسهای H5N1 در پرندگان خاكی اولین بار بود كه بعد از اپیدمی دسامبر 1997 رخ [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]طیور در فروشگاههی خرده فروش طی زمستان و بهار 2001 نو تركیبهایی بودند كه حاوی ژنهای NA,HA در درمان GO/Gd وژنهای داخلی دیگر ویروسهای مرغان آبی بودند .
5 نوع از نوتركیب ها با ژنوتایپهای طراحی شده A,B,C,D,E مشاهده شدند و با توجه به منشأ فیلوژنی و ساختار ژنهای داخلی گروه بندی شدند. ویروسهای تمام 50 ژنوتیپ شدیداً‌ برای جوجه ها و بلدرچین ها بیماریزا بودند همچنین تمام 5 [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]A در موش معمولا نیاز به آداپته شدن با میزبان جدید، كه طی رشد چند نسل پی در پی « پاساژهای پشت سرهم » ویروس در مغز یا ششها رخ می دهد .
مطالعه كسب بیماریزایی در طول آداپته [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]برخلاف دیگر ویروسهای آنفولانزای A مرغی و انسانی، سویه های مرغی و انسانی هنگ كنگ H5N1/97 جدا شده دارای پاتوژنیسته درموش می باشند بدون آداپته شدن. ویروسهای H5N1/97 در پاتوژنسیته برای موش هتروژنوس هستند: تعدادی از جداشده ها بسیار بیماریزا بودند و بصورت سیستمیک تكثیر می كردند در حالی كه دیگران[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]متمایز می باشد و شمای ملكولی فتوتیپهای H5N1/97 كه در موش بسیار پاتوژن هستند تعیین شده اند. بعلاوه، Hatta و همكارانش با استفاده ازتكنیكهای معكوس ژنتیكی بر پایه [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] ویروس (H5N1)A/Hongkong/483/97 در موش قطعی می باشد .
پاتوژسیته فتوتپهای كمو بسیار پاتوژن در یک مدل موش صحرائی عقیم مورد مطالعه قرار گرفته است: [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]در دستگاه تنفسی تكثیر می كند وقطعات ژنی بوسیله PCR در مغز و تعدادی ارگانهای داخلی عفونی شده تشخیص داده شدند اما هیچ گونه تكثیر سیتسمیک در این ویروس مشاهده نشد .
در مطالعات فعلی، از یک مدل موش برای تعیین خصوصیات پاتوژنسیته 5 ژنوتیپ ویروسهای H5N1 2001 هنگ كنگ در [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]می باشد .

ویروسها :
ویروسهای 5 نوع H5N1 مرغی ، از هر 5 ژنوتیپ كه در بهارسال 2001 در هنگ كنگ جدا شدند در این مطالعه مورد استفاده قرار گرفتند.
Genotype A,A/chicken/Hongkong/yu822.2/2001(ch/hk/yu822.2/01)
Genotype B,A/chicken/Hongkong/yu562/2001(ck/hk/yu562/01)
Genotype C,A/pheasant/Hongkong/Fyl55/2001(ph/HK/Fy155/01)
GenotypeE ,A/Chicen/Hongkong/NT87303/2001(CK/HK/NT87303/01).
ویروسها بوسیله یک پاساژ درجنین تخم مرغ جدا شدند. برای آماده سازی استوكها برای مطالعه در[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]برای 48تا40 ساعت در دمای c370 پاساژ داده شدند .
مایع آلانتوئیک حاوی ویروس خالص سازی شدند و میزان عفونت زائی آنها در تخم مرغ ها تیتر شد. تیترهای ویروس بعنوان log10 -50% از دوز عفونی كننده تخم مرغ در ml1/0 از مایع بیان می شد. (log10 50% EID50 per0.1 ml) باتوجه به متد. Reed , Muench استوكهای ویروس به دو دسته زنده و تازه و دسته نگهداری شونده در 80- تا موقع مصرف تقسیم بندی شدند .
تمام مطالعات با ویروسهای[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]
[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]بیماری زائی وتمایل بافتی ویروس H5N1 اصلی جدا شده از موش :
موش ماده 5/1 ماهه BALB/C برای این مطالعات مورد استفاده قرار گرفتند. برای تعیین 50% دوز كشنده در موش ( MLD50) ، 4گروه ازموشها بوسیله استنشاق ایزوفلوران بیهوش شدند [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]وزن شدند و برای 20 روز تحت نظر گرفته شدند .
تیتراسیون MLD50 نشان داد كه تمامی 5 ژنوتیپ ویروسهای H5N1/01 از گروه دارای پاتوژنسیته كم در موش بودند به همین دلیل آنها بطور قابل توجه ای ایجاد بیماری و مرگ و میر فقط در [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]
[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]عنوان دوز عفونی برای مطالعات بیشتر بر روی پاتوژنسیته انتخاب شدند. گروههای 18 تا 26 موش ها با ml 501 از مایع آلانتوئیک رقیق شده با PBS بصورتداخل بینی مورد تلقیح قرار گرفتند.
3 موش از هر گروه در روزهای 3و7 بعد ازتلقیح برای تعیین تیتر ویروس در ریه كشته شدند « روز 3 » و در مغز و ارگانهای داخلی « روز 3و7» .
موش باقی مانده در هر گروه بصورت روزانه وزن شدند و برای 20 روز تحت جهت مشاهده علائم بیماری و مرگ و [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]د خارج شدند. ارگانها در PBS سرد شسته شدند، وزن شدند، له شدند و در PBS سرد با آنتیبیوتیكها برای به دست آوردن یك هموژن 10% هموژنیزه شدند. ناخالصی های نمك بوسیله سانتریفیوژ كردن در z,[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]3تا 7 روز بعد از تلقیح هیچ ویروسی در مغز یا ارگانهای داخلی موش قابل تشخیص نبود. لیكن ویروس در مغز و ارگانهای داخلی موش كه علائم نورولوژیک را نشان می داد 8 تا10 روز بعد از تلقیح قابل تشخیص بود « بطور عمده فلج پای عقب»
نتایج بررسی پاتوژنسیته وبافت گرایی 5 ژنوتیپ H5N1/01 را به سه گروه تقسیم می كند:
[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]نشده جدا شد .» ویروس ژنوتیپ B فقط درششهای موش عفونی قابل تشخیص بود. عفونت با این ویروس باعث 55% مرگ و میر گردید.
گروه دوم متشكل از فقط یك عضو بود . ph/HK/FY155/01 ( ژنوتیپ c) ، كه در شش ها و مغز عفونی موش همانند سازی می كند .
عفونت با این ویروس منتج به [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] ها » دارای ویروس در مغز بودند .
ویروس ژنوتیپ c در ششها و مغز موش با تیتر مشابه ای، كه حداكثر میزان را نسبت به بقیه ژنوتیپ ها داشته مانند سازی كردند.
گروه سوم، شامل ویروسهای ژنوتیپ D,E كه[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]ویروسها مردند دارای ویروس در مغز بودند. نرخ مرگ و میر موش عفونی شده با CK/HK/FY150/01 « ژنوتیپ D »
و CK/HK/NT873.3/01بترتیب 5/61% و 3/33[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]ژنوتیپهای A,C,D,E « واریانت MB» از مغز بوسیله كشت مغز هموژن ویروس مثبت در تخم مرغ جنین دار 10 روزه با یک با پاساژ جدا سازی شدند .
ارزش EID50 , MLD50 [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]مایع آلانتوئیك رقیق شده باPBC حاوی تا از ویروس عفونی مورد تلقیح قرار گرفتند .
مغز، شش ها و ارگانهای داخلی موش كه مرده بود یا در مرحله پایانی بیماری كشتهشده بود خارج شدند .
واریانت های CK/HK/YU822.2/01 , MB, Ph/HK/FY155/01 –MB, CK/HK/FY150/01 –MB , CK/HK/NT87303/01 –MB طراحی شدند بطور قابلتوجه ای ازویروسهای اصلی [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] های MB با توجه به تمایل بافتی شان در یكی از دو گروه قرار می گیرند.
گروه اول شامل واریانت های با پاتوژنسیته بالا از ژنوتیپهای A,C می باشد كه بصورت سیستمتیک تكثیر پیدا می كنند و مغز و ارگانهای داخلی را عفونی می سازند. دوزهای بسیار عفونی كنندهاز این واریانت های MB منتج به مرگ در روزهای 3و5 شده، ‌دوزهای پایین تر موشها را 6تا 11 روز بعد از تلقیح می كشد. تلقیح با دوزهای تا از هر دو ویروس سبب ایجادعلائم نورولوژیک مانند فلج پاهای عقبی، tremor , paresis گردید.
تیتر ویروس واریانت MB از ژنوتیپ های A,C در كبد و طحال و كلیه وقلب حداقل log102 تا 5/3 پایینتر [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]و نوروتروفیگ هستند .
گروه دوم شامل واریانت های MB از ژنوتیپ E,D هستند كه فقط در شش ها ومغز موش های عفونی تشخیص داده شده اند .
واریانت ژنوتیپ D موش را 4تا8 [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]شده تشخیص داده شدند .
پاتوژنسیته CK/HK/NT873.3/01- MB « ژنوتیپ E» مشابه با واریانت ژنوتیپ D می باشد، بیشتر حیوانات در روز نهم مردند وعلائم نورولوژیک در موش عفونی شده با دوزهای 25/3 10 و [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]درشش ها و مغز مشابه بودند .

بررسی هیستوپاتولوژیک :
با تغییرات لوكالیزه پاتولوژیک در CNS باعث بروز علائم نورولوژیک می گردد، نمونه های مغز وطناب نخاعی موش عفونی شده با CK/HK/YU822.2/02 – MB
« ژنوتیپ A» و موشهایی كه درمرحله پایانی بیماری از بین رفتند در بافر خنثی فرمالین 10% فیكسگردیدند، در واكسن پارافین تثبیت شدند، برشهای 5 زده شدند، با هماتوكسیلین وائوزینرنگ شدند و برای تغییرات هیستوپاتو لوژیكال مورد ارزیابی قرار گرفتند.
دژنره شدن نرونها و نوروفاژیا با التهاب در اثر فیلتر نشدن گلرانولوسیتها و سلولهای مونونوكلوئر به ناحیه ساقه مغز و طناب نخاعی محدود می شد .
انفیلتراسیون سلولهای منونوكلوئر [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]ای و یک انكلوژن ائوزینوفیلیک كه به طور نسبی یاكاملا هسته را پر می كند. دژنراسیون نرونی و انفیلتراسیون التهابی همچنین درتعدادی از ریشه های dorsal گانگلیا مشاهده شد و تعداد زیادی از كانونهای نكروزهو سلولهای التهابی به همراه بافت تخریب شده مشاهده گردید.

مرفولوژی پلاک :
یكی از خصوصیات مهم ویروسهای آنفولانزا در توانایی تشكیل پلاک در سلولهای كشت داده شده می باشد. همانند پاتوژنسیته، این خصوصیت می تواند طی انتخاب شدن درموش [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] A,B,C,D تشكیل پلاكهای بزرگ را كه بخوبی قابل تشخیصمی باشد می دهند كه این از خصوصیات ویروسهای آنفولانزای مرغی بسیار پاتوژن می باشد. ویروس ژنوتیپ ( CK/HK/NT873.3/01 ) E پلاكهای كوچک و كدر را تشكیل میدهد.
پلاكهایی كه بوسیله ویروسهای با یك منشاء تشكیل می شود هموژنوس بودند.پلاكهایی كه بوسیله واریانت های MB تشكیل می شدند بزرگتراز آنهایی بودند كه بوسیله منشاء تشكیل می شد و واریانت MB ژنوتیپ (CK/HK/NT873.3/01 – MB ) پلاكهایی را تشكیل می دهند نسبت به پلاكهای ویروس منشاء بهتر شناسایی شده است . هیچ پلاكی مانند آنهایی كه بوسیله واریانت های MB در [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]های MB ژنوتیپهای C,D مشاهده گردید .
مقایسه توالی های ویروسهای منشأ و واریانت های MB مطالعات در موش نشان می دهد كه تلقیح منشاء ویروسهای H5N1/01 جداسازی شده ازژنوتیپ های A,C,D,E درموش منتج به انتخاب واریانت های بسیار پاتوژن و عصب دو ست میشود. با مقایسه تمام ملكول ایزوله های منشاء و واریانت های MB و تعیین اساس ملكولی[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]با استفاده از RNeasyminikit جدا سازی شد. پرایمر uni-12 برای نسخه برداری معكوس مورد استفاده قرار گرفت .
PCR با دسته ای از پرایمرهای عمومی كه برای قطعات ژنی ویروسهای آنفولانزای A اختصاصی می باشد انجام شد . محصولات PCR با كیت خالص سازی سریع PCR (QIA ) خالص سازی شدند. عملیات تعیین توالی و بررسی نمونه ها در مركز [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] استفاده نرم افزار بررسی توالی بهنام Lasergene بسته بندی گردید .
بررسی فیلوژنیک توالی های كل ژنوم از ژنهایواری انتهای MB H5N1/0 ، ویروس منشاء و CK/HK/YU562/01 ( ویروس ژنوتیپ B كه از مغز موش جدا نشده بود) نشان داد كه ایزوله های منشاء دارای همان پراكندگی مشابه 5ژنوتیپی هستند همانطوری كه قبلاً براساس تعیین توالی نسبی توالی مشاهده شده بود .
واریانت های متمایل به عصب [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]كه در ابتدا در موش به طریقه داخل بینی تلقیح شده بود.
تغییرات توالی های آمینواسیدی بین ویروس های original و واریانت های MB آنها با آنهایی كه بین فنوتیپهای موش H5N1/97 انسانی با پاتوژسیته بالا و پایین یافت میگرد مقایسه گردید.[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]original رااز واریانت های MB متمایز می ساخت ، همانطور كه از دیگر ویروسهای باپاتوژنسیته بالاو پایین تمایز می ساخت و آنها منحصر به فرد نبودند. طبیعت اتفاقی اینتفاوتها پیشنهاد می گردد كه ویروسها هتروژنوس هستند و دلالت می كند براینكه احتمال انتخاب سریع واریانت های بسیار [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]ی A,C,D . واریانت MB از ژنوتیپ A(CK/HK/YU822.2/01 – MB ) از ویروس original بوسیله تغییرات منحصر به فرد در بنیان 738 در PB2 پلی مراز ، بنیان 10 و 212 در PA پلی مراز ، بنیان 50 در HA وبنیان 86 در NS2 و بوسیله حذف 20 آمینواسید و جانشینی G بهجای S70 در NA متمایز[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]واریانت MB از ژنوتیپ D یک جانشینی منحصر به فرد در بنیان 97 در PA وجود دارد درحالیكه واریانت MB از ژنوتیپ E دارای چنین تغییراتی نبود. این موتاسیونهای منحصربه فرد ممكن است در اكتساب بیماریزای بالا و بیماری زای برای عصب در واریانت های MB دخیل باشند .
عدم وجود چنین تغییرات منحصر به فردی در واریانت MB از ژنوتیپ E میتواند در ابتدا بوسیله نوروتروپیسم بالا و [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] انسانی كه در سال 1997 جدا شده اند دارای ژنوتیپهای مشابهی هستند :
هتروژنیستی پاتوژنسیته آنها در موش نتیجه یک اختلاف كوچك در توالیهای ژنومهایویروسی بود. در [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]« كه از نظر فیلوژنیكی نزدیک به ویروسهای شبه GO/Gd می باشند » ویروسهای شبه GO/Gd كه در سال 1999 در هنگ كنگ جدا شدندجد ژنهای HA,NA و تعدادی از ژنهای درونی ویروسهای H5N1/01 بودند كه نشان داده[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]شده اند مافهمیدیم كه بیشتر ویروسهای H5N1/OS original همانند ویروسهای H5N1/99 شبه GO/Gd دارای پاتوژنسیته كمی در موش بودند وبهبافت عصب نیز تمایل داشتند. لیكن بر خلاف ویروسهای شبه GO/Gd ویروسهای H5N1/01 چهاتار از 5 ژنوتیپ A-E در مغز موش قابل تشخیص بودند. زخمهای اختصاصی ویروس در ساقهمغز وطناب نخاعی وجراحات التهابی ریشه های بالایی گانگلیا دلالت می كند بر اینكهاین واریانتهای [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]ا اداپته و بسیار بیماریزا شده بودند، مشاهده شد.ویروس ژنوتیپB به طور موثر در ششهای موش همانند سازی می كنند و سبب مرگ ومیر میشوند. اما درمقابل ویروسهای ژنوتیپ A,C,D,E ویروس ژنوتیپ B از مغز جدا نشد. تلقیح موش با واریانتهای MB جدا شده از مغز نشان می دهد كه این واریانتهادر موش بسیاربیماریزا هستند وحداقل دارای بیماریزای مشابه در موش[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]طی تكثیر در موش سریع به وقوع می پیوندد واریانتهای MB بسیار پاتوژن فقط طی یک پاساژ ویروس تولید می شوند. چنین انتخاب سریعی احتمالاًبوسیله اقامت طولانی غیر معمول این ویروسها در ششها امكان پذیر[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]بالای این ویروس در طیور و پستاندران شد: قطعات مختلف چندتایی ژن داخلی ویروسها كه به طور رایج در جنوب شرقی چین در چرخه هستند می توانند كامل بكنند ژن HA ویروس شبه GO/Gd برای تولید ویروسهای كه بسیار بیماریزا هستند و در میزبان پستاندارخاصیت نوروتروپیک دارند. بنابراین HA ویروسهای شبه GO/Gd كه دارای سایتهای برشچندتایی هستند [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]با ژنهای داخلی كامل شوند ایفا كنند.
ویروس ژنوتیپ A ازنظر داشتن ژنهای PA,M از رده فیلوژنیک شبه GO/Gd با ژنوتیپ B متفاوت است. ژنوتیپهای C حاوی ژنهای NP,BP1 از ویروسهای شبه GO/Gd است كه این ژنها ژنوتیپ C را از ژنوتیپ A,B متمایز می سازد.
ژنوتیپ های D,E فقط در ژن NP شان با همدیگر و با ژنوتیپ C فرق می كند ویروس ژنوتیپ B حاوی ژنهای HA,NA ای است كه از نظر فیلوژنی به ویروسهای شبه GO/Gd نزدیک می [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]طی یک پاساژ در موش انتخاب نمی شوند. ژن HA از ویروسژنوتیپ B كه دارای سایتهای برش چندتایی كه از ویروسهای شبه GO/Gd منشاء گرفته اندبه تنهایی كافی نیستند. تا معرف یک ویروس با بیماری زایی بالا و نوروتروپیسم درموش حداقل طی یک پاساژ باشد .
در مقابل جمعیت ویروس ژنوتیپ B جمعیتهای [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]هستند چرا كه یک پاساژ از این ویروسها در موش منجر بهانتخاب واریانتهای بسیار پاتوژن می شوند. مقایسه توالی ها بین واریانتهای MB و فتوتیپ ویروسهای H5N1/97 هنگ كنگی كه برای موش بسیار پاتوژن هستند و ویروسهایاداتپه شد. با موش هیچ گونه از سریهای معمول موتاسیونها را نشان نمی دهد .
فقطجانشین K به [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]فقط در ویروسژنوتیپ C یافت می شد. فقدان یكسری موتاسیونهای رایج در واریانتهای بسیار پاتوژن ونوروتروپیک پیشنهادمی كندكه راههای مختلف زیادی برای ویروسهای آنفلونزای H5N1/01 هنگ كنگی برای دستیابی به بیماری بالاونوروتروپیسم در موش وجود دارد. شرط لازمبرای نوروویرولانس ویروسهای H5N1/01 هنگ كنگی درموش و انتخاب سریع [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]HA ضروری می باشد. اما برای اینكه این ویروسها رابسیار پاتوژن ونورو ویرلانت در موش باشد كافی نمی باشد، تغییرات اختصاصی در پروتئینهایPA,PB2 پلی مراز در این فرایند دخیل هستند بنابراین ما حدس می [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]A و PB2 « ژنوتیپهای C,D,E» ازمنشاء شبه GO/Gd به زمینه كمپلكس همانند ساز از یک رده فیلوژنی دیگر تسهیل می شود.سوال در مورد ارتباط پاتوژنسیته ویروسهای H5N1 هنگ كنگی در موش باتوانایشان دربیماریزای در انسان و دیگر گونه های پستانداران منطقی می باشد[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]طیور در هنگ كنگ در سال 2001 یک راه مفید برای ریشه كنی این ویروسها و جلوگیری از انتخاب چنین واریانتهای بسیار پاتوژنیبود.

Accession توالیهای نوكلئوتیدی
توالیهای نوكلئوتیدی بدست آمده در این مطالعه در ژن بانک تحت شماره از Accession AY221592 تا AY221521 نگهداری می شود .

موادو روشها
جدا سازی ویروس وشناسایی آن :
بعد از شناسایی ویروس A/Goose/Guang/1/96 (GSGD/1/96) (H5N1)[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] مرغی توسط مسئولین درشهرهای Castol چین و استان های Guangdong , Guanxi,Fujian , Zhejiang , Shanghai شروع شد .
نمونه های كلوآک از اردكهای [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]NI» با یکجدول آنتی سرمی كه بوسیله دفتر بین المللی آزمایشگاه رفرنس به نام Des Epizooties محدود در چنین اختصاصی _ بیماریزا و تخم مرغ آزاد بطور بیولوژیكی كلون گردید. تمامیآزمایشات با [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]بالا ( HEPA – filtered ) انجام گرفت.

آزمایش حیوانات، جوجه ها :برایتعیین پاتوژنسیته ویروسهای جدا شده شاخص بیماریزائی V 10 ( IVPI ) تست شد با توجهبه دستور كار دفتر بین المللی. DesEpizooties گروههای 10 تایی جوجه های سفید Leghorn ، 6 هفته و اختصاصی و عاری از عوامل پاتوژن در قفس های جدا كننده نگهداریشدند وبا 2/[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]dose از هر ویروس در یک طیف 1/0 ml مورد تلقیح قرار گرفتند، در روز سوم، 3 تا از جوجه های هر گروه تلف شدند ومیزان ویروس در نمونه های شش، bursa ، كلیه، تیموس، [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]سیلین 10% فیكس شدند وبا هماتوكسیلین وائوزین رنگ شدند. نمونه های فیكس نشدهبرای عفونت زائی ویروس درجنین های تخم مرغ تیتر شدند.
موش : گروههای 8 تاییموش های ماده BALB 6 تا 8 هفته كمی با CO2 بیهوش شدند وبصورت n 10[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]3 ، سه تا از 8 موش را برای تیتركردن میزان ویروس در شش ها، كلیه ها، طحال، و مغز كشته شدن. دوز حداقل كه 50% موشها را می كشد ( MLD50 ) بوسیله متد Muench , Reed محاسبه شد .
اردكها :گروههای 5 تایی از اردكهای 3 هفته بطریقه x10 با 85.7 10 تا 5.8 10 ( eIO50 ) از [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]جمع آوری شدند .
بررسی ژنتیكی وفیلوژنیكی : RNA ویروسی از مایعات آلانتوئیک بوسیله استفاده كیت RNeasy , Mini خالص سازی شدند و نسخه برداری معكوس شدند. تكثیر با PCR بوسیله استفاده از پرایمرهای اختصاصی قطعات انجام گرفت. محصولات PCR با Kit خالصسازی QIA-quick PCR خالص سازی شدند و با استفاده از كیت Quick start – CEQDTCS برروی یک DNA سكوانسر CEQ8000 تعیین [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]لوژنیک با برنامه MEGALIGN با استفاده از الگوریتم مسیر GLSTAL ساخته شد .
شماره Accession توالیهای نوكلئوتیدی : توالی های نوكلئوتیدی كه در این مطالعه به دست آمدند از ژن بانکبا شماره :
( accession nos . AY585357 – AY85524 )قابل دسترسی هستند .

نتایج :
بررسی آنتی ژنیكی : تستهای HI , NI با آنتی سرمهای رفرنس نشان داد كه هر یک از ویروسها تحت تیپهای H%N! می باشند. ویروسها دارایالگوی مشابه واكنش HI < NI هیچ گونه شواهدی دال بر دریفت آنتی ژنتیكی درویروسهای[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] – تا خوردگی كمتر از تیترهای هترولوگوس HI بود .
مطالعات در جوجه ها : ما از IVPI وروش پیشنهادی دفتر بین المللی Des Epizooties برای ارزیابی بیماریزایی ویروس در جوجه ها استفاده كردیم .
تمام جداشده ها، با این معیار بیماریزا بودند. لیكن یكی از آنها زودتر جدا شدند ( OKGX/07/99 ) فقط نیمی از جوجه هایی را كه به صورت V10تلقیح شده بودند كشتند. و میانگین زمان مرگ (MDT) دو تا از جدا شده های اولیه 8 روز بعد از تلقیح به صورت x 10 بود. ویروسهای H5N1 جدا شد در سال 2000 تنوع در MDT ( [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]).یک تمایل به زیاد شدن افزایش در IVPA در وقت اضافی وجود دارد. در 7 تا ازنمونه های جدا شده در 1999 و 2000 IVPA 3-9/2 بود. استثناء DKGX/53/02 بود كه IVPA آن 1/2 و MDT بیش تر از 5/6 روز داشت كه دال بر پاتوژنسیته خیلی كمتر می باشد،تمام جوجه هایی كه در روز 2و3 بعد از تلقیح مردند دارای جراحاتی بودند كه دلالت برهمانند [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]هیستوسایتیک همراه با ادم، نكروز حاد پانكراس، نكروز خفیف طحال، نفروزیس حادیا ضعیف و نكروز خفیف تا حاد بورسابودند. فقط شواهد مربوط به DKGX/07/99 دال برتكثیر غیر سیستمیک داشت.

مطالعات در موش :
بیشتر ویروسهای [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]از تست كردن بیماریزایی آنها در موش، بطور بیولوژیكی هرویروس جدا شده را بوسیله 3 چرخه محدود رقت در جنین های جوجه اختصاصی – بیماریزا و بدون جنین كلون قرار دادند .
هیچ پاساژ كوری در موش انجام نشد. اطلاعات از یکپاساژ x 10 در موش به دست آمده اند .
بر اساس توانایی تكثیر و قدرت كم كردن وزن و ایجاد مرگ و میر، ویروسهای H5N1 جدا [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] مشاهده نشد ویروس در موش غیر پاتوژن محسوب می شود. ویروسهایی كه می توانستند در موش تكثیر كنند بیشتر به گروههای پاتوژنسیته كم (LD506.5Log 10 eID50 M ) ، متوسط ( 3log10eID50 MLD50 6.5log10eID50 ) یا زیاد ( MLD 3log10eID50) ، بر اساس قدرت كشندگی شان در موش تقسیم بندی می شدند. گروههای غیر پاتوژن [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]تكثیر می كردند،تمام این موشها تا روز 14 بعد از تلقیح دچار تغییرات سرمی شده بودند .
یکدوز بالا از این ویروسها ( eID50 بیشتر از 5.6 10 ) برای كشتن موش مورد نیاز بودتمام 7 ویروس در گروه با بیماریزائی متوسط در ششهای موش تكثیر پیدا كردند. سطحپایینی از دو ویروس در طحال تشخیص داده شد و یكی از ویروسهای جدا شده (DKSH/8/01 ) درسطح خیلی پائینی در مغز یافت شد. تمامی این ویروسها سبب عفونت كشنده در موش شدنداما دوز بالای ویروس ( eID50 [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]بالائی در ششهای موش تكثیر می یابند و وجود ویروس در طحال، كلیه و مغز دال بر عفونت سیستمی; می باشد . MLD50 ویروسها در این گروه كمتر از (203log10eID50 ) بود .

ما یكافزایش سطح پاتوژنسیته برای موش را با پیشرفت زمان مشاهده كردیم:
ویروسهای جداشده در[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]جدا شده درسال 2002 ( DKGX/53/02 ) دارای بیماریزایی كم بود .

مطالعات در اردكها:
اردكهای وحشی میزبان طبیعی ویروسهای آنفولانزا هستند. تمام تحت تیپهای آنفولانزای مرغی ازاردكهای وحشی جدا شده اند و هیچ یک از آنها كه شامل تحت تیپهای بسیار پاتوژن H5,H7 نیز می باشند و هیچ سابقه تاریخی دال بر ایجاد بروز علائم یا مرگ در اردكها ندارند .
بطور غیر منتظره، [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]5 تایی اردكها را با 6 ویروس H5N1 كه نماینده ویروسهای مطالعه شده دراین تحقیق می باشند شامل 3 ویروس از زیر گروه بسیار پاتوژن در موش تلقیح كردند . « 5 تا از 6 ویروس H5N1 جدا شده در مرغابی ها همانند سازی كردند. آنهادارای ریزش ویروسی از تراكه یا [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]در اردكها نشد.
بررسی ملكولی وفیلوژنتیكی : برای تعیناساس ملكولی مشاهدات، تمامی ژنوم هر یک از 21 ویروس جدا شده تعیین توالی شدند. توالی ها با توالی های نماینده H5N1 شامل آنهایی كه از GSGD/1/96 و انواع انسانی جداشده از هنگ كنگ در سال 1997 HK/156/97 , HK/483/97 , HK/486/97 به دست آمده از بانک[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]اردكهای صادراتی ازچین به جنوب كره نیز مورد بررسی فیلوژنیكی قرار گرفتند.
ژنهای NA ویروسهای H5N1 جدا شده از ویروسها بیشتر به ژنهای (GSGD/1/96 96.4-9803% همولوژی ) نزدیك بودند تا ویروسهای جدا شده HK/97 ازیك شاخه جداگانه با NA هایی می باشد كه مااز اردكها جدا كردیمNA های ویروسهای جدا شده از اردكها به دو چنگال تقسیم میشدند كه DKGX/07/99 پایه وستون چنگال GSGD/1/96 , B1 پایه چنگال B2 می باشد. هر [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]دی بدست آمده نشان می دهد كهتمامی ویروسهای درچنگال كه از GSGD/1/96 مشتق می شوند دارای یک حذف 20 آمینواسیدیدر ساقه NA هستند ( بنیان 49 تا 68 )، در حالی كه خود GSGD/1/96 این طور نیست.این حذف در ساقه NA ، دارای فاصله اما هم پوشانی با حذف 19 آمینواسیدی یافت شد درویروسهای HK/97 جدا شده از انسانها[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]ندارد.
درخت فیلوژی ژنهای PA,PB1,PB2 از 22 ویروس H5N1 خیلی شبیه بودند .
‌c_e ویروسهایانسانی HK/97 جدا شده از یک شاخه مجزا بودند، در حالی كه ویروسهای جدا شده ازاردكها و GSGD/1/96 به دو چنگال اصلی كه در آن ویروسهایی كه جلوتر جدا شده اند بطورغالب در یک شاخه هستند تقسیم بندی می شوند. در درخت فیلوژنی PB2، ژنهای دو چنگالدر شاخه B سهم [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] PB1.PA دارای 93-90% همولوژی بودند ومی توان آنها را به عنوان خانواده متفاوتی در نظر گرفت.

درخت فیلوژنیک «NP » نوكلئوپروتئین متفاوت بود: ژنهای NP از 3 ویروس جدا شده از اردكها ( DKSH/35/02 , DKSH/38/01 , DKGX/50/01 ) یک شاخه جداگانه را تشكیل[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]مطابقت نمی كند تشكیل می دهند. درخت فیلوژنیک M« ماتریكس » ژن دقیقاً مشابه با درخت ژنهای پلی مراز بود، اما M ژنهای DKGD/40/00 , DKFJ/19/00 درچنگال متفاوتی در شاخه B كه خودش به باقی مانده ها، شامل ویروسهای انسانی HK/97در آلل B مجزا می شدند.
4 ویروس اردكی وGSGD/1/96 در آلل A قرار داشتند، در حالی كه باقی مانده ها، شامل [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]15-nt می باشد كه منجر به یک حذف 5 آمینو اسیدی در NS پروتئینمی شود. بر اساس تنوع ژنومیكی، ویروسها 9 ژنوتیپ را تشكیل میدهند.
این مسئله كه ژنهای [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]كه مسیر واضح ازافزایش تصاعدی بیماریزایی این ویروسها در میان ژنوتیپهای مشابه، بخصوص ویروسهایژنوتیپ A,D دیده می شود.
DHSH/35/02 ,DKSH/38/01 در ژنوتیپ مشابه قرار دارند.اما DKSH/35/02 3 10 بار كشنده تر از DKSH/38/01 در موش می باشد.بیماریزایی متفاوت دو ویروس در ژنوتیپهای گروهی H,I بیشتر از به ترتیب 105X ,106 X می باشد . این نتایج پیشنهاد می كند كه موتاسیونهای بخصوص بیشتر از ساختار ژنومی ممكن است قدرت بیماریزایی آنها را تعیین سازد .

بحث :
این مطالعه شرح می دهد كه قبلاً جدا سازی ویروسهای آنفولانزای H5N1 تعیین خصوصیت نشدهاز اردكهای منطقه mainland چین از GSGD/1/96(H5N1) گزارششده اند. یافته های مانشان می دهند كه ویروسهای آنفولانزای بسیار بیماریزا [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] پایه در محل برش HA بودند كه بابیماریزائی بالا همراه بود.
یافته ها مشخص كرد كه ویروسهای آنفولانزای H5N1 درمیان اردكهای اهلی در چین از 1999 تا 2002 كه درچرخش هستند قادر به تكثیر در موش بوده و سبب عفونت سیستماتیک و مرگ بدون سازگار شدن در موش می شوند.
[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید].
فاكتورهایی زیادی گزارش شده اند كه با بیماریزائی H5N1 همراه می باشند. مطالعات معكوس ژنتیكی نشان داده كه بنیان 627 پروتئین PB2 یك نقش حیاتی در بیماریزائی H5N[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]درتعدیل پاسخ سیتوكاینی رابازگو می كند. مطالعات معكوس ژنتیكی نشان داده اند كه بان 92 از ملكول NS1 از نمونه های ویروسهای (H5N1) A/HK/156/97 انسانی با القاء بیماریزائی شدید در خوكها همراهمی باشد. لیكن ، تمامی ویروسهای H5N1 اردكی دارای بنیان های آمینو اسیدی حفاظت شده GLV-627 در PB2,ASP-92,GLY-228 ( [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]در موش شركت نكنند. سوال مهمی كه باقی می ماند این است كه چگونه و چه وقت ویروسهای H5N1 توانایی تكثیر پستانداران را پیدا كردند.
نتایج نشان می دهد كه همانطور كه ویروسهای H5N1 در میان اردكهای اهلی در چرخش هستند، خصوصیاتی در آنها پدید می آید كه می توانند برای موش كشنده باشند. یكشرح احتمالی برای این یافته ها انتقال ویروسهای H5N1 از اردک به انسانها، تكاملانتخابی ویروسها در انسان ها و متعاقباً انتقال دوباره آن[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]آنفولانزای آسیایی باعث عفونتهای محدود كشنده یا حاد در انسانها می شوند، اما از انسان به انسان منتقل نمی شوند. انتقال بازگشتی ویروسهارا از انسانها به اردكها را به سختی می توان اثبات كرد، علی رغم وجود شواهدی كه درمورد انتقال ویروسهای آنفولانزای مرغی H9N2 از اردكها به دیگر طیور و سپس برگشت آنها به اردكها وجود دارد.
مسئله اساس ملكولی [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] ویروسی، شامل HA دخیل هستند.تعدادی ساختارهای ژنهای مرغی چنین فرض می شود كه باعث انتقال به پستانداران میشوند. ویروسهای آنفولانزای H3N2كه در خوكها در سال 1997 در ایالت متحده وجود داشتهاند نوترتیبهای 3 تایی بودند كه حاوی قطعات ژنی از ویروسهای [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]H1N1 كه بطور رایج در اروپا دارای انتشار وسیع هستندحاوی ژنهای ویروسهای آنفولانزای مرغی كه در سال 1999 یافت شدند می باشند. در نتیجه، ژنهای ویروس آنفولانزای مرغی، وقتی كه آنها قسمت عمده ای از ساختار ژنی باشند،به نظر می رسد كه بتوانند در میان گونه های پستانداران منتقل شوند. ارزیابی ژنوتیپهای مختلف ویروسهای H5N1 در اردكها ممكن است ساختار ژنهایی را كه سبب انتقالبه [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]H5N1 آنها در این مطالعه تعیین خصوصیت شدند ، خوكها واردكها در كنار یكدیگر نگهداری میشوند خصوصاً در مزارع روستایی كه [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]رخ می دهد و همچنین احتمال انتقال بین خوكها واردكها پیدامی كنند. امروزه، هیچ گزارشی از جداسازی ویروسهای H5N1 از خوكها وجود ندارد، اگرچه خوكها بطور آزمایشگاهی باویروسهای H5N1 عفونی شده اند. ما اخیراً شواهد ویروسشناسی و سرولوژیكی از عفونت زائی ویروس H5N1 در خوكها دراستان Fvjian بدست آوردیم .
با این حقیقت كه یكی از ویروسهایی كه در اینجا مورد مطالعه قرار گرفتند قادربه ایجاد عفونت در اردكهای تلقیح شده نبودند با فرضیه ما هماهنگ نبودند و در اثرتماس با اردكها نیز منتقل نشدند. لیكن، تجربیات ازمایشگاهی بطور كامل وضعیت یك مزرعه را نمی تواند شبیه سازی كند، كه ممكن است شامل استرس و عفونت های همراه باچند باكتری یا ویروس باشد. بنابراین، انتشار ویروس در اثر تماس با اردک بهواحدهای ایزولاتور محدود می شود جایی كه مدفوعهای عفونی كننده حیوانات از طریق توریهای سیمی به درون محفظه ای می ریزد و ذخیره هوای HEPA فیلتر شده می باشد. لیكن،می توانیم از یافته هایمان چنین نتیجه گیری كنیم كه ویروسهای H5N1 جدا شده از مرغابیها در 2002 در این مطالعه برای اردكها بسیار كشنده نیستند، همانطوری كه ویروسهای H5N1 جدا شده از پرندگان وحشی آبی در نوامبر 2002 در هنگ كنگ این چنین بودند.جداسازی ویروسهای H5N1 كشنده جوجه ها از اردكهای به ظاهر سالم وجود ویروسهای H5N1 را در گوشت های مرغابی صادراتی به ژاپن و جنوب كره را توجیه می كند. لیكن، بررسی جزئیات ژنوتایپی 21 ویروسی كه ما جدا كردیم دال بر چرخش ویروسهایی در میان اردكهای منطقه mainland چین در سال 20002-1999 بود كه با ویروسهای H5N1 هنگ كنگی جدا شده ازفروشگاه های طیور زنده بوسیله GuaM فرق داشتند. ارتباط بین این ویروسهای H5N1 اردكیبا ویروسهای H5N1 جداشده از چین در 2004 بایستی تعیین گردد .
ژنهای HA,PB2 بنظرمی رسد كه یك نقش عمده را در تكثیر و بیماریزائی ویروسهای H5N1 در موش دارند. یافتهها دلالت بر این می كند كه ژنوتایپهای چندتایی ویروسهای آنفولانزای مرغی بطوربالقوه می توانند در پستانداران بیماریزا گردند. بطور مشخص، ویروسهای آنفولانزای H5N1 بطور مداوم در آسیا درحال ظاهر شدن هستند. مراقبتهای مداوم بهمراه تعیین جزئیات ساختارهای ژنی و تعیین بنیانهای اختصاصی ضرروی برای انتقال به پستانداران حیاتی می باشد .

سدهایی كه طیف میزبانی ویروس را تعیین می سازد :
به دلیل نقش HA در تشخیص[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]دارد كه از آنها جدا شده اند.
ویروسهای آنفولانزای انسانی ترجیحاًسیالیل الیگوساكارید هایی را شناسایی می كنند كه در انتها دارای یک N استیل سیالیکاسید لینك شده با گالاكتوز بوسیله پیوند 6،2 هستند.( NevAc 2,6 Gal ) در حالی كه ویروسهای مرغی N استیل [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]در محلهای همانند سازی ویروس بسته به نوع میزبان متفاوت است .
برای مثال، سلولهای اپیتلیال در تراكه انسان حاویبطور عمده NevAC2,6Gal است، در حالی كه در تراكه اسب و روده اردک « جایی كه ویروسهای مرغی تكثیرمی یابند » حاوی به طور عمده باندهای NevAC2,6Gal می باشد.
جالب است كه سلولهای اپی تلیال در تراكه خوک حاوی هم باندهای NevAC2,6Gal و [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید].
در نتیجه ، اختصاصیت میزبان ویروسهای آنفولانزا می تواند تحت تاثیر میزان این دو نوع باندهای سیالیک اسیدگالاكتوز در سیالیل الیگوساكاریدها درسطح سلول باشد. حتی چنین تصور می شود كه درمیزان غالب بون سیالیل الیگوساكاریدها در محل[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]باشد .
بررسی ژنتیک تعیین میزبان اختصاصی از طریق كمپلكس همانند سازی / نسخه برداری ویروس آنفولانزای Aقطعات ژنوم ویروس مرغی نه تنها گلیكوپروتئین های سطحی را « HA ,NA » راكد میكند بلكه همچنین RNA , PB1 پلی مراز را نیز كد می كند.

موادوروشها :
كلون كردن ملكولی CDNAها :
RNALO ویروسی را از ویروسهای A/FPV/ROSTOCK/34 ، A/Mallard/NY/78 . A/Hong kong/156/97 (HK) رشد كرده بر رویجنین 11روزه تخم مرغ یا برروی سلولهای DMCK جمع آوری كردی CDNA ها طول كاملژنوم بوسیله نسخه [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] هر ژن PB1 , PB2 , PA , NP تكثیر شدند .
CDNA در رشته ای سپس در سایت ECORV ازحامل پلاسمیدی PHMG كلون گردید و توالی های آنها تعیین گردیدند. CDNA بدست آمده ازویروسهای A/PR/8/34(PR8) , A/Victoria /3/75(Victoria) بوسیله به ترتیب A.Portela , J.Pavlovic آماده شدند.

روش همانن سازی گذرا :پلاسمید Ppoli-cat-rt برای اجازه دادن به بیان یک نسخه ساختگی شبه [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید][مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] سانتی گراد ، سلولها جمع آوری شدند و عصاره های سلولی برای فعالیت CAT تستشدند .

بحث :
نتایج ما باعث شناسایی آمینواسید 627 از PB2 بعنوان یک تعیین كننده عمده میزان كارآئی كمپلكس همانند سازی ویروس آنفولانزایA در سلولهای پستانداران ، با توجه به مشاهداتی كه قبلا از ویروسهای نوترتیب گزارش شده بود، شد .
كسب قطعه PB1 از ویروس [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] "آنهایی كه در پاندمی های 1968 و 1957 دخیل بودند اعضا میكند .
بر هم كنش های PB2-PA ,PB2-NP می توانست در ثبات كمپلكس همانند سازی دخیل باشد و بنابراین ممكن است باعث محدود تعدادی از وقابع نوترتیبی كه در تطابق قطعات ژنی دخیل هستند شود .
بعضی از خصوصیات ملكولی پروتئین های PB1,PB2,PA می توانست برای تعیین بیماریزائی ویروس A/HK/156/97 در [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]
[مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید] [مشاهده لینک ها فقط برای اعضا امکان پذیر است لطفا ثبت نام کنید]گردد .